法医物证 DNA 又被称为“新一代物证之王”。然而,随着犯罪嫌疑人反侦察能力的提高,遗留在案犯现场的物证DNA十分有限,且含有大量抑制物,如何从微量物证检材中提取到足够多的 DNA 用于遗传标记物分型鉴定,一直是法医物证 DNA 分析检验的难点。
针对这一问题,团队提出基于“电荷吸附”原理的微量DNA高效富集新方法,使用1%浓度的壳聚糖修饰50nm磁性颗粒,在酸性条件下,通过静电作用吸附带负电荷的DNA。为模拟实际案件现场,团队制备了含有腐殖酸、色素、铁绣以及以上三种物质共存的实验样品,将人支气管上皮细胞与上述样品混合,并使用400 L裂解缓冲液、20 L蛋白酶K(10 mg/mL)和20 L壳聚糖磁性珠溶液(20 mg/mL)进行细胞裂解和DNA富集。研究结果表明,壳聚糖磁性珠的提取灵敏度为10个细胞以下量级,优于现有方法,且壳聚糖磁珠提取的DNA无需洗脱,可直接进行“原位PCR扩增”。该方法提取的DNA样品 STR位点的检出率达到97.9%,高于现有同类方法(66.7%)。该方法的优势不仅在于DNA的高效富集,而且通过静电吸附的方式避免了传统方法可能导致的DNA断裂,提高了STR位点检出率。该成果在法医物证 DNA 鉴定,祖源分析、烈士遗骸鉴定、重大灾难遇难者身份确认等领域具有广阔应用前景。
硕士研究生胡安中为论文第一作者,朱灿灿副研究员为通讯作者。该项研究工作得到了国家重点研发计划、国家自然科学基金,安徽省重点研发计划等项目支持。
论文链接:www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1872497323001072
壳聚糖纳米磁珠吸附原理及过程
壳聚糖纳米磁珠与传统方法DNA提取性能对比